Microscopía de fluorescencia: 5 datos importantes que debe saber

Contenido

¿Qué es la microscopía de fluorescencia?

Microscopios de fluorescencia un tipo de microscopio compuesto que funciona con varias variantes de fuentes de luz que tienen diferentes rangos de longitud de onda para hacer fluorescer una muestra para producir imágenes que reemplazan el uso de transmisión, absorción, reflexión y dispersión. Estas variantes microscópicas se utilizan principalmente para observar muestras biológicas. La microscopía de fluorescencia se puede lograr utilizando el diseño simple de un microscopio de epi-fluorescencia o un microscopio confocal complejo.

¿Cómo funciona la microscopía de fluorescencia?

La muestra se mantiene primero en la platina microscópica. Luego, la muestra se ilumina dependiendo de la cantidad de luz necesaria. En microscopía de fluorescencia, la luz de diferentes longitudes de onda se utiliza para iluminar la muestra y luego esta luz es absorbida por el fluoróforos presente en la muestra que además emite un haz de luz de longitudes de onda más largas o de un color diferente al de la luz entrante. Se utiliza un filtro de emisión espectral para separar la luz emitida más débil de la luz de iluminación más fuerte. Un microscopio de fluorescencia general tiene las siguientes partes.

1. Un filtro de excitación.
2. Un espejo dicroico o divisor de haz.
3. Un filtro de emisiones.
4. Una fuente de luz (que puede ser una lámpara de arco de xenón, una lámpara de vapor de mercurio, LED de alta potencia o láseres).
5. Un juego de lentes de objetivo..
6. Una lente ocular.
7. Un escenario para contener la muestra.
8. Un detector.

El divisor de haz dicroico y los filtros de excitación y emisión se seleccionan de tal manera que la excitación espectral sea compatible con las características de emisión, del fluoróforo utilizado para marcar las muestras y así es como se detecta la distribución de un solo color o fluoróforo en ese momento. . Para observar imágenes multicolores, es necesario combinar varias imágenes de un solo color. Ciertos diseños microscópicos vienen con un CCD (dispositivo de carga acoplada) en el tubo del microscopio en lugar de una lente ocular. En un microscopio con CCD instalado, la formación de la imagen se produce en la pantalla de un monitor al colocar el CCD en el plano de imagen intermedio.

¿Qué es la microscopía de epi-fluorescencia?

En la microscopía de epifluorescencia, la excitación de la muestra con fluorescencia y la detección de la luz fluorescente emitida se realiza siguiendo el mismo camino de la luz, es decir, a través de la lente del objetivo. Estos microscopios se utilizan especialmente para observar muestras vivas. Para obtener una mayor resolución de imágenes, se debe aumentar la apertura numérica de la lente del objetivo. La epifluorescencia produce una alta relación señal / ruido, ya que cierta cantidad de luz reflejada se combina con la luz emitida por la muestra. Por esta razón, se utiliza el divisor de haz dicroico. Este divisor de haz actúa como un filtro de longitud de onda selectivo y transmite solo la luz de fluorescencia emitida al ocular o lente ocular.

¿Cuáles son los deméritos de la microscopía fluorescente?

1. Con la iluminación de los fluoróforos a lo largo del tiempo como resultado del proceso de fotoblanqueo, los fluoróforos pueden perder su capacidad de fluorescencia. El fotoblanqueo ocurre cuando las moléculas fluorescentes sufren gradualmente el daño químico debido a la excitación de los electrones durante la fluorescencia. El fotoblanqueo puede afectar gravemente el período de tiempo de observación de una muestra mediante microscopía de fluorescencia. 
2. La microscopía de fluorescencia ha permitido el examen de células vivas. Sin embargo, estas células vivas son propensas a la fototoxicidad (principalmente con luz de longitud de onda corta) y la molécula fluorescente puede producir agentes reactivos específicos cuando se ilumina, lo que aumenta aún más el efecto fototóxico.
3. La microscopía de fluorescencia puede permitir la obtención de imágenes y la observación de solo ciertas estructuras que han sido etiquetadas para fluorescencia. es decir, se podría observar una muestra de tejido con la ayuda de microscopías de fluorescencia si las muestras se presentan con una tinción de ADN fluorescente. Esto podría mostrar la organización del ADN dentro de las células, pero no puede revelar nada sobre la morfología celular.

¿Cómo se prepara una muestra fluorescente?

Sabemos que la microscopía de fluorescencia permite la obtención de imágenes y la observación de solo ciertas estructuras que han sido etiquetadas para fluorescencia. Por tanto, la muestra a observar se hace fluorescente mediante diversas técnicas como:

1. Tinciones biológicas fluorescentes: Se fabrican varios tipos de tinciones fluorescentes, que son compatibles con una variedad de muestras biológicas. Algunos ejemplos de tales tinciones de fluorescencia son DRAQ7 y DRAQ5 (excitados por luz roja), Hoechst y DAPI (excitado por luz de longitud de onda ultravioleta), faloidina, Péptido de hibridación de colágeno, etc.
2. Inmunofluorescencia: La inmunofluorescencia se utiliza para unir un anticuerpo.
3. Proteínas fluorescentes: Las proteínas fluorescentes se utilizan para modificar el ADN de modo que las moléculas demuestren fluorescencia.

Para saber más sobre microscopio compuesto visite https://techiescience.com/compound-microscope-working-5-important-uses/

Lea también

• Microscopía de sonda de barrido
• Descripción detallada del túnel de viento
• ¿Cómo se forma la sombra?
• Isoterma de adsorcion
• Exosfera 2
• ¿Qué es la pinza neumática?
• ¿Por qué la amortiguación crítica es más rápida que la sobreamortiguada?
• Inversamente proporcional
• Regla del cociente
• Ósmosis vs difusión

Sanchari Chakraborty

Hola, soy Sanchari Chakraborty. He realizado el Máster en Electrónica.
Siempre me gusta explorar nuevos inventos en el campo de la Electrónica.
Soy un aprendiz entusiasta y actualmente invertido en el campo de la Óptica y Fotónica Aplicadas. También soy miembro activo de SPIE (Sociedad Internacional de Óptica y Fotónica) y OSI (Sociedad Óptica de la India). Mis artículos tienen como objetivo sacar a la luz temas de investigación científica de calidad de una manera sencilla pero informativa. La ciencia ha ido evolucionando desde tiempos inmemoriales. Entonces, pongo mi granito de arena para aprovechar la evolución y presentarla a los lectores.
Conectemos a través de